• 2024/03/28 21:00
  • ±ÛÀбâ
      Á¦¸ñ: [ÀÀ´ä][ÀÀ´ä]µðÀÚÀÎ ÁÖÀÇ»çÇ×¹× Á¤Á¦
      ¹øÈ£: 487  À̸§: ±è¼º·ü  Á¶È¸¼ö: 14955
      À̸ÞÀÏ: breeder@postech.ac.kr   È¨ÆäÀÌÁö: http://
    ´äº¯ °¨»çÇÕ´Ï´Ù.
    ¾ÕÀ¸·Î primer design¿¡ Âü°í ÇÏ°Ú½À´Ï´Ù.
    ±×¸®°í Àú´Â º¸Åë primer¸¦ ¹°¿¡ ³ì¿© ¾²´Âµ¥ TE buffer¿¡ ³ì¿© ¾²´Â°Ô ´õ ÁÁÀºÁö¿ä?


    ¿Ã¸®°íÇÕ¼ºÆÀ ´ÔÀÇ ¿øº»±Û
    ***********************************************************
    ¿©·¯°¡Áö ÁÖÀÇ»çÇ×Àº ÀÖ½À´Ï´Ù. ÇÏÁö¸¸ ÀúÈñ ¿Ã¸®°í»ç¾÷ÆÀÀº ¾î¶°ÇÑ ½ÃÄö½º°¡ ÀÖ´ÙÇÏ´õ¶ó°í ÇÕ¼ºÀ» Çس¾¼ö°¡ ÀÖ½À´Ï´Ù.

    primer design ¿¡¼­ ABC ¶ó°í ÇÒ¼ö ÀÖ´Â Á¡Àº ¹Ýº¹¼­¿­À» ¸¹ÀÌ »ç¿ëÇÏÁö ¾Ê¾Æ¾ß Çϴ°ÍÀÔ´Ï´Ù.


    1) purine °è¿­ÀÇ ¹Ýº¹¼­¿­ µðÀÚÀÎ ----> Depurination
    ¿Ã¸®°í ÇÕ¼º¿¡¼­´Â 3% trichloroacetic acid(¸Å¿ì°­ÇÑ »ê)À» ÀÌ¿ëÇÏ°Ô µÇ´Âµ¥ »ê¼ºÁ¶°ÇÇÏ¿¡¼­´Â purine base(ƯÈ÷ adenosineÀÎ °æ¿ì) °ú sugar ring »çÀÌ°áÇÕÀÌ ²÷¾îÁö´Â depurination ¹ÝÀÀÀÌ ÀϾ¼öÀÖ¾î ¿Ã¸®°íÇÕ¼ºÀÌÈÄ ¹®Á¦Á¡À» ¾ß±â ÇÒ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ƯÈ÷ ¿¬¼ÓÀûÀÎ AAAAAAA °¡ ¸¹ÀÌ Æ÷ÇÑµÈ ¼­¿­¿¡¼­´Â ¿À·ù°¡ ¹ß»ýÇÒ¼ö ÀÖÀ¸¸ç,
    ´Ü¼øÈñ PCR ÀÌ µÇÁö¾Ê´Â´Ù°íÇÏ´Â °æ¿ì 3'ÂÊÀÇ ¹æÇâÀ¸·Î adenosine ¼­¿­µé¿¡¼­ÀÇ depurinationÀÌ ÀϾÀ»¼öµµ ÀÖ½À´Ï´Ù.

    ÀÌ·¯ÇÑ ¹®Á¦¸¦ ±Øº¹Çϱâ À§ÇØ, ÇÕ¼º¿¡¼­ »ç¿ëµÇ´Â °­»ê 3% trichloroacetic acid ,¾à»ê dichloroacetic acid À» º´Çà»ç¿ëÇÏ°í ÀÖÀ¸¸ç ÇÕ¼º±âÀÇ ÇÁ·Î±×·¥À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¿Ïº®È÷ ÇÕ¼ºÀ» ÇØ°áÇÏ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.

    ÇÏÁö¸¸ ÀÌ·¯ÇÑ Á¡À» °í·ÁÇÏÁö¾ÊÀº ¿Ã¸®°íÀÇ µðÀÚÀο¡¼­´Â ¹®Á¦Á¡ÀÌ ¹ß»ýÇÒ¼öÀÖ½À´Ï´Ù.

    DNAÀÇ °æ¿ì´Â acidicÇÑ Á¶°Ç¿¡¼­´Â depurination¿¡ ÀÇÇØdecomposeµÉ ¼ö ÀÖÀ¸´Ï
    pH¸¦ ³·ÃßÁö ¸»¾Æ¾ß ÇÕ´Ï´Ù. ´ëºÐºÐÀÇ °æ¿ì Áß¼º pHÀÇ H2O¸¦ »ç¿ëÇÏ°í °è½Ã°í ÀÖÀ¸´Ï ÀÌ·¯ÇÑ ¹®Á¦´Â ¾øÀ»°Í ÀÔ´Ï´Ù.
    ÇÏÁö¸¸ ´ë»ó sample¿¡¼­ ¹ß»ýÇÏ´Â ¹®Á¦¸¦ ±Øº¹ÇϽðí, purity°¡ ³ôÀº sampleÀ» ¿Ã¸®°í¿Í ¹ÝÀÀ½ÃÄÑ »ç¿ëÇϽô ÁÖÀÇ´Â ÀÖ¾î¾ß ÇÏ°Ú½À´Ï´Ù.

    2) G °¡ ¸¹Àº ¼­¿­ µðÀÚÀÎ
    hairpin Çö»ó¹× self-dimerÇü¼º Ȥdms hetro dimerÇü¼º¹®Á¦´Â µðÁöÀÎÀ» ÅëÇØ ÇØ°áÇÑµÚ ½ÇÇè¿¡ ÀÓÇØÁֽʽÿÀ.
    GGGGGGCCCCCC ÀÌ·¯ÇÑ ¿¹ÀÎ ¿Ã¸®°í cccGGG Sam IÀ» °£Áø PrimerÀÇ °æ¿ì Ä÷³Á¤Á¦°¡ Èûµé°Ô µË´Ï´Ù. ¹°·Ð ÇÕ¼º¿¡¼­µµ óÀ½ scale º¸´Ù ȸ¼ö·®ÀÌ ÀûÀ» »Ó¾Æ´Ï¶ó
    PCR °úÁ¤¿¡¼­µµ Á¶±ÝÀÇ ÁÖÀǸ¦ ¿äÇÏ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.

    hairpin Çö»óÀº 5' ºÎºÐ¿¡¼­ Çü¼ºµÉ°æ¿ì °¡±ÞÀû PAGEÁ¤Á¦¸¦ ±ÇÇÏ°í ÀÖ½À´Ï´Ù. ÀÌ·±°æ¿ì PAGEÁ¤Á¦¸¦ ÇÒ°æ¿ì ÁÁÀº °á°ú¸¦ ¾ò°Ô µË´Ï´Ù.
    ¿©·¯¹ø Á¦Ç°À» ³³Ç°ÇÏ¿© ¾òÀº°á°ú·Î GC % 60% ÀÌ»óÀÇ °æ¿ì¿¡´Â PAGEÁ¤Á¦¸¦ ÇÏ¼Å¾ß ÁÁÀ» °á°ú¸¦ ¾ò°Ô µÇ½Ç°Ì´Ï´Ù.


    3) ÀÌ ¿Ü¿¡ È­ÇÐÀû¹ÝÀÀ¿¡ ¹®Á¦Á¡À̳ª »ç¿ëÇϽô taqÀÇ ¹®Á¦Á¡ÀÔ´Ï´Ù.

    ÀϹÝÀûÀ¸·Î ¿°±â 'G''´Â enol tautomerÀÎ 2,6-diaminopurineÀ¸·Î ÀüȯµÉ ¼öµµ ÀÖÀ¸¸ç, ÀÌ °æ¿ì DNA polymerase¿¡ ÀÇÇØ 'A'·Î Àνĵ˴ϴÙ.
    µû¶ó¼­, modified base¸¦ Æ÷ÇÔÇÑ oligonucleotide¸¦ °®´Â cloneÀº 'G'°¡ 'A'·Î ġȯµÈ °á°ú¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.

    ÇÕ¼º»ó¿¡¼­ ¿À·ù°¡ Æ÷ÇÔµÉ È®·üÀ» °¡Áø ºÎºÐÀÔ´Ï´Ù.
    ÀÌ·¯ÇÑ ¿À·ù°¡ÀÖÀ¸¹Ç·Î Àü ¼¼°è ¿Ã¸®°íÇϿ콺¿¡¼­ 100%ÀÇ ¿Ã¸®°í´Â ¸¸µé¾î³»Áö¸øÇÑ´Ù´Â ÀÔÀåÀ» Ç¥¸íÇÏ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.

    ¶ÇÇÑ , ÀÌ·¯ÇÑ °æ¿ì´Â ½ÇÇè½Ç¿¡´Â ÃæºÐÈ÷ test µÈ taqÀ» ÀÌ¿ëÇϽñ⠶§¹®¿¡ ¹®Á¦°¡ ¹ß»ýÇÏÁö ¾ÊÀ» °ÍÀ¸·Î ¿¹»óµË´Ï´Ù. ÇÏÁö¸¸
    ÁÖÀǸ¦ ¿äÇÏ´Â ºÎºÐÀ̱⵵ ÇÕ´Ï´Ù.





    ***********************************************************
      °ü·Ã±Û
    [Áú¹® ¹× Á¶¾ð]
         ¢Ñ [ÀÀ´ä]µðÀÚÀÎ ÁÖÀÇ»çÇ×¹× Á¤Á¦
           ¢Ñ [ÀÀ´ä][ÀÀ´ä]µðÀÚÀÎ ÁÖÀÇ»çÇ×¹× ...
             ¢Ñ [ÀÀ´ä][ÀÀ´ä][ÀÀ´ä]µðÀÚÀÎ ÁÖÀÇ»ç...